Na installatie van de nieuwe kolom w e r den de diverse standaard-mengsels geïnjecteerd in d e o n g e w i j z i q d e e l u e n t i a + flowsnelheid. Hieronder volgen de retentietijden in d e 2 l o o p v l o e i s t o f f e n . HPLC : van C 1 8 n a a r C 8 , wordt dat sleutelen? 1) Anti-epileptica (0,50 il/iin) W. Huisman, J.M. Sterrenburg Laboratorium Apotheek, Ziekenhuis de Heel Kon. Julianaplein 58 ,1502 DV Zaandam. Naar a a n l e i d i n g v a n het in E x t r a c t g e publiceerde artikel over de bepaling van tricyclische antidepressiva in KKGT testsera [ 1 ] , besloten wij om deze kolom eens uit te proberen. Uit praktische overwegingen was het voor ons van belang dat d e h u i d i g e r o u t i n e m a t i g e H P L C - b e p a lingen, zonder al te veel wijzigingen aan het H P L C - s y s t e e m , o o k o p d e in dit a r t i k e l g e n o e m d e C 8 - k o l o m [2] u i t g e v o e r d konden w o r d e n . In d e routine bepalen wij behulp van 2 HPLC-systemen de volgende stoffen: 1) A n t i - e p i l e p t i c a . - Primidon - Fenobarbital - Fenytoine - Carbamazepine + metaboliet nterne-standaard: cyclobarbital Luens : 1,80 g N a H P O . 1 2 H [3] in 5 0 0 ...1 g e d e s t i l l e e r d w a t e r o p p H 6,50 b r e n gen met fosforzuur 1 0 % Voeg toe 500 ml m e t h a n o l [ 3 ] . F i l t r e e r o v e r 0,45 \i f i l t e r [3] o n d e r v a c u ü m . Flow : 0,50 m l / m i n 2 4 2 O 2) C o f f e i n e . Interne-standaard: 8-chloor-theofylline STOF RTC18 primidon fenobarb. CBZ-epox. cyclobarb. fenytoine carbamazep. 2) 2 4 2 O Onze vorige kolom betrof 2 gekoppelde C18 kolommen van elk 10 cm lengte + voorkolom in een c a r t r i d g e - s y s t e e m [ 4 ] . Voor de goede o r d e : deze kolom voldeed voor dit doel overigens uitstekend. RTC8(0,75«l/m"n) 4,3 4,8 5,3 6,7 9,3 10,0 Coffeine (0,75 STOF il/iin) RTC18 RTC8 RTC8(1,00nl/Rfn) theofylline 3 ,3 6 ,3 4,8 coffeine 4,5 6,3 8,3 8-Cl-theof. 6, 8 1 2 ,6 9,7 Hieruit blijkt dus dat de a-polariteit van deze C8 kolom, ondanks de kortere lengte en de kortere koolstof-ketens, hoger ligt dan d e C 1 8 . Uit de resultaten blijkt dan pok dat alleen een flow-snelheid verhoging noodzakelijk is om bijna weer hetzelfde chromatogram te verkrijgen. Ons doel was hiermee bereikt: 1 kolom voor zowel de anti-depressiva als voor de routinebepalingen zonder "gesleutel". [1] "Bepaling van tricyclische antidepressiva zoals deze voorkomen in de KKGT testsera", ing. R. Langen. Laboratorium Ziekenhuis Apotheek Midden-Brabant, Maria Ziekenhuis, Tilburg. Extract Jaargang 3 Nr. 3. [2] Kolom Shandon Hypersil BDS C8 5 jun 150 x 4.6 mm, cat no 59874582 + voorkolom Shandon Hypersil BDS C8 5 jun, cat no 66940055. LC-Service, Emmen. [3] Na HPO .12H 0 p.a. Merck 6579 Methanol HPLC Labscan C2517 Membranfilter RC55 0,45 jun, 50 mm Schleicher&Schuell Ref.no. 410214 NaH P0j.2H 0 p.a. Merck 6345 Tetrahydrofuraan p.a. Merck 9731 Alles via Boom, Meppel. 2 E l u e n s : 7,8 g NaH PO .2H [3] i n 8 0 0 ml g e d e s t i l l e e r d w a t e r . V o e g t o e 70 ml methanol [2] + 2 0 m l tetrahydrofuraan [ 3 ] . B r e n g d i t g e h e e l o p p H 5,0 m e t N a O H 4n. Vul aan tot 1000 m l m e t g e d e s t i l l e e r d w a t e r . F i l t r e e r o v e r 0,45 fj f i l t e r [3] o n d e r v a c u ü m . F l o w : 0,75 m l / m i n RTC8 3,5 6,5 4,0 7,1 8,0 4,6 5,8 1 0 , 1 7,8 1 4 , 0 15 9, 4 2 4 2 2 [4] 2 x Chromspher C18, 5 /im, 100 x 3 mm, cat no 28267 + voorkolom. Chrompack, Middelburg. Voor chromatogrammen, zie blz 10 1) Chromatogram anti-epileptica. KKGT referentieserum 2) Chromatogram cardiaca. KKGT referentieserum — CHROMATOGRAM PKNO TIME C-R5A MEMORIZED HIGHT MK 9.297 6 10.01? 87064 SAMPLE CBZ-EPOXIBE V 1 5 FENYTOINE V 6 V 5 8 4 V 90522 66184 NO IS 20.21 9 2 25846 METHOD FENOBARBITAL . 4.738 . 6. 7 9 6 FILE 0 3 2 5.315 1 NO REPORT 34665 R CYCLOBARB'93 CARBAMAZEPIN CHROMATOPAC SAMPLE CHANNEL PRIMIDON 4. 291 4 NAME 2 1 3 IDNO 9.889 WT PKMO NO O 1023 UT 160 1 TIME 1 4.988 2 6. 5 4 8 3 9.889 TOTAL HIGHT 13256 IDNO MK R 1 CONC NAME THEOFYLLINE 9291 2 COFFEINE 27791 3 INT.ST. 50337