Biología Forense Dra. Ana María López Parra Laboratorio de Genética Forense Departamento de Toxicología y Legislación Sanitaria. Facultad de Medicina. Universidad Complutense de Madrid (UCM) Biología Forense Ventajas del análisis de ADN 1. Aumenta la probabilidad de discriminación: El resultado de un análisis genético permite EXCLUSIÓN INCLUSIÓN NO EXCLUSIÓN ¿Con que poder de discriminación? Kits comerciales Nombre TH01, TPOX, CSF1PO monoplexes Marca Promega Fecha Biología Forense STR Loci *Poder de Discriminación Feb 1993 TH01, TPOX, CSF1PO 1:410 1:410 1:5000 AmpFlSTR® Blue Applied Biosystems Oct 1996 D3S1358, VWA, FGA AmpFlSTR® Green I Applied Biosystems Jan 1997 Amelogenin, TH01, TPOX, CSF1PO 1:410 CTTv Promega Jan 1997 CSF1PO, TPOX, TH01, VWA (vWF) FFFL Promega Jan 1997 F13A1, FES/FPS, F13B, LPL GammaSTR Promega Jan 1997 D16S539, D13S317, D7S820, D5S818 PowerPlex™ (version 1.1 and 1.2 later) Promega Jan 1997 CSF1PO, TPOX, TH01, VWA, D16S539, D13S317, D7S820, D5S818 1:6600 1:1500 1:1.8x104 1:1.2x108 AmpFlSTR® Profiler™ Applied Biosystems May 1997 D3S1358, VWA, FGA, Amelogenin, TH01, TPOX, CSF1PO, D5S818, D13S317, D7S820 1:3.6x109 AmpFlSTR® Profiler Plus™ Applied Biosystems Dec 1997 D3S1358, VWA, FGA, Amelogenin, D8S1179, D21S11, D18S51, D5S818, D13S317, D7S820 1:9.6x1010 AmpFlSTR® COfiler™ Applied Biosystems May 1998 D3S1358, D16S539, Amelogenin, TH01, TPOX, CSF1PO, D7S820 1:8.4x105 AmpFlSTR® SGM Plus™ Applied Biosystems Feb 1999 D3S1358, VWA, D16S539, D2S1338, Amelogenin, D8S1179, D21S11, D18S51, D19S433, TH01, FGA 1:3.3x1012 PowerPlex™ 2.1 Promega Jun 1999 D3S1358, TH01, D21S11, D18S51, VWA, D8S1179, TPOX, FGA, Penta E 1:8.5x1010 PowerPlex™ 16 Promega May 2000 CSF1PO, FGA, TPOX, TH01, VWA, D3S1358, D5S818, D7S820, D8S1179, D13S317, D16S539, D18S51, D21S11, Penta D, Penta E, amelogenin 1:1.8x1017 AmpFlSTR® Identifiler™ Applied Biosystems May 2001 CSF1PO, FGA, TPOX, TH01, VWA, D3S1358, D5S818, D7S820, D8S1179, D13S317, D16S539, D18S51, D21S11, D19S433, D2S1338, amelogenin 17 1:2.1x1017 1:2.1x10 *Población caucasoide Biología Forense Ventajas del análisis de ADN 2. Estudio de todo tipo de indicios biológicos e indicios mínimos Biología Forense Ventajas del análisis de ADN 3. Análisis de muestras antiguas y degradas, y mezclas Biología Forense Ventajas del análisis de ADN 4. Estudio de indicios genéticos atípicos Biología Forense Ventajas del análisis de ADN 5. Creación de bases de datos Bases públicas con interés criminal y/o investigación científica. EDNAP mtDNA Population Database Biología Forense Procesamiento de muestras de Muestra obtenida en prueba ADN paternidad / escena del crimen Extracción de ADN Cuantificación de ADN Análisis de marcadores genéticos Obtención del perfil genético de la muestra Comparación del perfil de la muestra con el resultado de otras muestras Si coincide, comparación del perfil con base de datos poblacional Generación de Informe del caso con probabilidad de coincidencia al azar Biología Forense Indicios Biológicos “ Toda sustancia líquida o sólida que provenga directamente del cuerpo humano o que haya estado en contacto con el mismo, y en cuya superficie o interior pueda haber restos de células” Biología Forense Tipos de indicios Sangre Semen Pelo Saliva Orina Fluido vaginal Diente Restos óseos Células y Tejidos Liquido amniótico Biología Forense Tipos de evidencias Preservativos Chicles, colillas Sobres y sellos Armas blancas Llaves, monedas, joyas Piedras, ramas, hojas Billetes, papeles Ropa Biología Forense Tipos de indicios biológicos: Indicios indubitados o de referencia: Indicios dubitados: -Personas vivas -Recogidas en el lugar de los hechos -Personas transfundidas -Recogidas en el cuerpo de la víctima -Cadáveres en buen estado de conservación -Cadáveres carbonizados -Cadáveres en avanzado estado de putrefacción -Cadáveres embalsamados Biología Forense “Normas para la preparación y remisión de muestras objeto de análisis por el Instituto Nacional de Toxicología” BOE nº 308 de 23/12/96 B.O.E. DEL 19 DE MAYO DE 2010 8030 ORDEN JUS/1291/2010, de 13 de mayo, por la que se aprueban las normas para la preparación y remisión de muestras objeto de análisis por el Instituto Nacional de Toxicología y Ciencias Forenses. Biología Forense Grupo Español y Portugués de la Sociedad Internacional de Genética Forense (GEP-ISFG) • Universidad de Valencia. • Jefatura de Investigación y Criminalística, Dirección General de la Guardia Civil, Madrid. • Universidad de Granada. • Instituto Nacional de Toxicología y Ciencias Forenses, Sevilla • Comisaría General de Policía Científica, Madrid. • Instituto Nacional de Toxicología y Ciencias Forenses, Madrid. Biología Forense Cadena de custodia Documento escrito donde queda reflejada la gestión de la muestra desde su toma hasta su destrucción o devolución. En la hoja de custodia debe aparecer: - Nombre o identificación y firma de la/s persona/s responsable/s de la entrega de las muestras. - Nombre o identificación y firma de la/s persona/s responsable/s de la recogida de las muestras. -Fecha y hora de la recogida. -Condiciones de almacenaje de las muestras hasta su envío al laboratorio. Biología Forense Organización del genoma ADN CELULAR ADN NUCLEAR ADN MITOCONDRIAL COPIA ÚNICA (70%) Codificante 10% No codificante 60% REPETITIVO (30%) No codificante 20% Codificante 10% Exones Intrones Reguladores DNA intergénico DNA repetido disperso Repeticiones en tándem Minisatélites (20-70bp) DNA repetido agrupado (DNA satélite) Repeticiones dispersas Microsatélites (2-4bp) Biología Forense Tipos de variación genética Short Tandem Repeats CTA 7 repeticiones 8 repeticiones Biología Forense Tipos de variación genética SNPs (Single Nucleotide Polymorphism) • Variaciones de secuencia de ADN en una sola base • Para que la variación sea considerada un SNP debe darse en, al menos, un 1% de la población Biología Forense Tipos de polimorfismos de ADN • • • • Polimorfismos nucleares autosómicos Cromosoma Y Cromosoma X ADN mitocondrial ADN NUCLEAR Biología Forense Marcadores autosómicos - Copia doble Herencia paterna y materna TPOX r Poco abundante en muestras críticas / arqueológicas / antropológicas D3S1358 D8S1179 D5S818 FGA D7S820 TH01 VWA CSF1PO * Relaciones familiares (paternidad y maternidad) * Casos forenses * Identificación de desaparecidos D18S51 D13S317 D16S539 D21S11 AMEL AMEL Mini STRs Biología Forense Biología Forense Marcadores autosómicos 10-15 10-18 18-15 10-15 15-18 10-18 Biología Forense Herencia del cromosoma Y CROMOSOMA Y - Copia única Regiones no recombinantes Herencia exclusivamente paterna Secuencia total ADN ~60 Mb r Poco abundante en muestras críticas - Gran interés en investigaciones forenses 98% crímenes violentos cometidos por hombres Biología Forense Biología Forense Herencia del cromosoma X Biología Forense Herencia del ADN mitocondrial Biología Forense ADN MITOCONDRIAL - Abundancia Por célula: 1000-10000 copias mtADN vs 2 copias nADN - Copia única no recombina herencia exclusivamente materna - Útil para la reconstrucción del pasado reciente de las poblaciones humanas µ región control=2’06 10-6 - 4’14 10-6 r Resolución más baja que marcadores nucleares Biología Forense Diferencias respecto a la Secuencia de referencia 16090 16100 16110 16120 16130 16140 rCRS ACCGCTATGT ATTTCGTACA TTACTGCCAG CCACCATGAA TATTGTACGG TACCATAAAT Q ACCGCTATGT ATCTCGTACA TTACTGCCAG CCACCATGAA TATTGTACAG TACCATAAAT K ACCGCTATGT ATCTCGTACA TTACTGCCAG CCACCATGAA TATTGTACAG TACCATAAAT 16129 16093 Muestra Q 16093C 16129A Muestra K 16093C 16129A Adapted from Figure 10.8, J.M. Butler (2005) Forensic DNA Typing, 2nd Edition © 2005 Elsevier Academic Press Biología Forense Identificación personal por ADN Haplotipo: Conjunto de alelos de diferentes marcadores que definen a un individuo (Huella genética o DNA fingerprint) Ejemplo: Marcadores nucleares D3S1358 D8S1179 D5S818 HUMVWA D21S11 D13S317 10-12 15-21 7-9 8-8 10-15 8-12 Ejemplo: Cromosoma Y DYS388 DYS389I DYS389II DYS390 12 10 26 14 Ejemplo: Región Hipervariable I de mtDNA 16069A, 16126C, 16261T Biología Forense Bases de datos de interés poblacional o forense - STRs autosómicos: - ADN mitocondrial: EDNAP mtDNA Population Database - Y- STRs: Otros… Low-Level DNA (LL-DNA) • Biología Forense <100 pg ADN genómico (~15-17 copias diploides de ADN nuclear) • Normalmente se requiere 150-250 pg Allele imbalance Allele dropout Biología Forense AIM (Ancestry Informative Markers) Biología Forense Physical trait Markers Biología Forense Estudio de indicios genéticos atípicos
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