BD Select CD1000 Medium TM 製品規格・L- グルタミン不含（推奨添加濃度：2 - 4 mM）・ヒポキサンチン及びチミジン不含組成が明らかなプラットフォーム培地で・組換えヒトインスリン含有・プルロニック F-68 不含（推奨添加濃度：0.1% w/v）加水分解物や培地添加物による最適化も可能です・フェノールレッド不含・pH：7.2 ± 0.2 ・浸透圧オスモル濃度：320 - 360 mOsm/kg ・エンドトキシン：1.00 EU/ml 以下カタログ番号製品名包装希望小売価格（円） 215204 BD SelectTM CD1000 液体＊ 1 L 015,000 215205 BD SelectTM CD1000 液体＊ 20 L 260,000 215206 BD SelectTM CD1000 粉末 500 g（25.451 g/L） 220,000 215207 BD SelectTM CD1000 粉末 10 kg（25.451 g/L）お問い合わせください＊ 200 Lまでの特別包装が可能です。ご希望の際にはご相談ください。関連製品情報 BD Select CHO は CHO 細胞用の培地で、目的タンパク質の収率を向上させるための、BD Cell MAb はミエローマやハイブリドーマ用の培地で、モノクローナル抗体の生産性を向上させるための最適化がそれぞれ施されています。カタログ番号製品名包装希望小売価格（円） 220253 BD SelectTM CHO 1 L 16,500 220511 BD CellTM MAb 基礎培地 1 L 08,800 220509 BD CellTM MAb 無血清培地 1 L 11,000 220513 BD CellTM MAb アニマルコンポーネントフリー 1 L 11,000 ＊DifcoはBeckton, Dickinson and Companyの関連会社であるDifco Laboratories, Inc.の商標です。＊BD、BDロゴおよびその他の商標はBecton, Dickinson and Companyが保有します。©2009 BD Speed, Safety, Yield . . . 65-105-00 R0-0907-001-184 We do that. Speed, Safety, Yield . . . BDSelectCD1000Mediumは、バイオ医薬品製造用途にデザインされた組成が明らかな（ChemicallyDeﬁned）培地です。図2 BD Select CD1000を用いたときの複数細胞種の抗体産生能加水分解物添加による影響 300.00% 300.00% 250.00% 250.00% 抗体産生量（コントロール値で標準化）抗体産生量（コントロール値で標準化） We do that. 図1 BD Select CD1000を用いたときの GS CHO細胞の抗体産生能 200.00% 150.00% 100.00% 50.00% コントロール（0％ライン）は市販の完全合成培地 0% 0% さらなる最適化が図れるように設計されています。イオ医薬品製造でよく使用されるセルライン向けに開発された DesignofExperiments(DOEs)を用いて、BDAutoTM Nutrient MediaDesignService(AMDS) の手法により開発いたしました。マ BD Select CD1000を用いたときのGS CHOならびにNS0の抗体産生能培地添加物の添加条件検討 350.00% GS CHO 添加物#1 GS CHO 添加物#2 300.00% NS0 添加物#3 200.00% 150.00% 100.00% 50.00% BDSelectCD1000 は高性能な基本培地ですが、さらに添加物を加えることによって、収率を向上させることが可能 NS0 ドー BD Select CD1000を用いたときのGS CHOの抗体産生能加水分解物の添加条件検討題を解決するために、BD は新しい組成が明らかな（ChemicallyDeﬁned）培地である SelectCD1000 を、バブリ図4 抗体産生量（コントロール値で標準化）加水分解物や培地添加物を加えることによって、ハイ CHO 図3 250.00% 抗体産生量（コントロール値で標準化）理想的な製品特性を有しており、制約などがあるため、容易ではありません。このような問 GS バイオリアクターフラスコセルラインごとに、最高のパフォーマンスを示すために必様々なセルラインに対応可能なプラットフォーム培地としてコントロール（0％ライン）は Select CD1000 のみ D10 BD Select™ CD1000 のセルラインに最適な基本培地を見出すことは、時間の 100.00% Sele Sele Sele 酵母 ct CD1 酵母 ct CD1 酵母 ct CD1 0 エキ 000 エキ 000 エ 00 の（＋＋ 0、3 キス 00＋ス（ス（み 0日 0、3 日目目）日目）） ct C BDSelectCD1000Medium は、 150.00% 50.00% Sele 要な栄養バランスは異なりますが、実際には、それぞれ 200.00% 0% コントロール（0％ライン）は Select CD1000 のみ 200.00% 150.00% 100.00% 50.00% 3g /L 酵です（図 1）。加えて、BDSelectCD1000 は用途が広いた 250.00% め、CHO、NS0 ならびにハイブリドーマ細胞など、多様 9g 母エキス /L 酵母エ 17 g キス /L 酵 3g 母エキス /L 酵母/ 6g 大豆 /L 酵 /小コントロール（0％ライン）は Select CD1000 のみ麦エ母/ キス小麦エキスブブレ酵母エキス= BD Difco ™ TC Yeastolate UF ンド 0% 0日 3日毎日目供供給給給目供 0日 3日毎日目供供給給給目供 0日 3日目供毎日供給給給目供レンドな細胞種に対して適用できるだけでなく、培地の最適化 BDSelectCD1000Mediumは、に要する時間、リソース、コストを節約することもできます。各製造プロセスへの最適化を迅速に行うことができる上に、 CHO、NS0 ならびにハイブリドーマ細胞を用いて、加水分解物を添加してみたところ、有意な収量の増加が認めら＊原料はすべて AnimalFree です。＊：原料が動物材料を出発物質とする場合は 3 工程以上の処理工程を経たもののみを使用しています。れました（図 2）。 Adaptation Protocol 細胞に最高のパフォーマンスを発揮させるためには、添特長メリット加物の選別などプロセスの最適化が必要となりますが、基本培地：CHO、NS0 ならびにハイブリドーマ細胞を含む多様な細胞種に適用することが可能培地の最適化に要する時間、リソース、コストの節約図 3 ならびに図 4 に示す通り、加水分解物や培地添加物加水分解物や培地添加物を加えることによってさらなる最適化が可能収率の向上最適化プロセスの簡素化 BD Select™ CD1000 Medium の供給条件を検討することにより、さらに収量を上げることができました。BDSelectCD1000 は多様な細胞に適用できる汎用性を有しているだけでなく、添加物の供給条件を検討することによって、迅速かつ低コストで最適化ができる理想的なプラットフォーム培地です。 BD Select™ CD1000 is a chemically-defined, animal-free medium that is ideally suited for further hydrolysate or chemically-defined supplementation. This medium is formulated without L-Glutamine, Hypoxanthine, Thymidine, and Phenol Red. BD Select CD1000 is designed to support cell growth and protein production in CHO, NS0, and hybridoma cell lines. Culture Recommendations 1. BD Select CD1000 should be supplemented with all ™ necessary cell specific supplements (e.g GS Supplement, HT, L-Glutamine, or Cholesterol) Finally, seed cells at 3.0 – 5.0 x 105 cells/mL in 100% BD Select CD1000. Allow at least 3-4 passages in BD Select CD1000 before moving cells into the production system. It is best not to change to 100% BD Select CD1000 at a point when the cells can be passed as necessary. Once the cells are completely adapted (3-4 passages at 100% BD Select CD1000), a cell bank can be created. A freezing solution of 10% DMSO and 90% BD Select CD1000 is a recommended freezing solution. Adaptation by Selection BD Select CD1000 Medium Selection Adaptation process may be used when cells are unable to be weaned to BD Select CD1000 by either of the above mentioned processes. Hydrolysate Usage Protocol 2. Cells should be seeded between 2.0 – 3.0 x 105 cells/mL 3. Cultures should be incubated at 37±2ºC and 5% CO2 1. Transfer cells growing in the current (original) medium directly into BD Select CD1000 at 3.0 – 5.0 x105 cells/mL. Direct adaptation procedure can be used for the cells that 2. Allow cells to drop below 50% viability without subculturing. ofTransfer a 10%cells Hydrolysate Stock Solution (100 g/L) may readily adapt intoPreparation the new medium. 3. After cells have fallen below 50% viability, centrifuge cells growing in current medium BD (or Select CD1000 to a mixing vessel 1. Adddirectly 50 mLinto of WFI equivalent) and re-suspend the entire pellet in the original medium at at 3.0 – 5.0 x 105 cells/mL during10.00 the logarithmic growth 2. Weigh g of hydrolysate and add to the while stirring thevessel appropriate culture volume. phase. When viable cell density reaches 1.0 – 1.5 x 106 cells/mL, 3. to Allow the hydrolysate to stirphase, until all particles are dissolved and cells solution has cleared 4. Continue to culture in original medium until viability or the culture is in midlate-logarithmic growth reaches ≥into 90% for at 3 passages. 4. QS the hydrolysate pouring the solution a 100 mLleast volumetric flask During this time, subculture the cells. Repeat subculturingmixture at leastbythree times at 2-3 day intervals. If the viability drops below 80% mark cells should be subcultured only after reaching a viable cell and adding water to the gradation density ≥ 1.0 x 106 cells/mL or the culture is in mid- to lateduring the procedure,5.adapt thefilter cellsthe sequentially Sterile hydrolysateasmixture and store at 2-8ºC growth phase. logarithmic described below. Direct Adaptation 5. After cells have regained ≥ 90% viability, passage the cells at 4.0 – 5.0 x 105 cells/mL in the appropriate culture Hydrolysate titration should be performed in 125 mL shake flasks in duplicates. It is recommended to use a concentration volume back into BD Select CD1000. Complete adaptation from old0-13 medium to BDallSelect rangethe from g/L. Add cell specific supplements to media before starting assay (e.g. L-Glutamine, HT etc.). Run CD1000 is achieved best in aforfour step, sequential process. Again,falls allow cells 50%, to drop below 50% viability assay a minimum of 14 days or until cell6.viability below whichever occurs first. without First, seed the cells at 3.0 – 5.0 x 105 cells/mL in 25% subculturing. Centrifuge cells and re-suspend entire pellet 1. Add no hydrolysate to 50 mL of base media for 0 g/L hydrolysate concentration BD Select CD1000 medium and 75% of the current culture in original medium. Hydrolysate Titration Sequential Adaptation 500during µL of the 10%logarithmic hydrolysate solution to 50 mL of base media for 1 g/L hydrolysate concentration medium. Cells should 2. be Add seeded 7. Repeat steps 4 through 6. growth phase with at 3. least 80% than solution to 48.5 mL of base media for 3 g/L hydrolysate concentration Add 1.5(preferably mL of 10%greater hydrolysate 8. After 3-4 iterations of the above process, cells should 90%) viability. Passage the cells in this media combination 4. Add 2.5 mL of 10% hydrolysate solution totransition 47.5 mL of media for 5 g/L to base BD Select CD1000 onhydrolysate final cycle. concentration Continue for at least 2-3 passages or until the cells retain normal subculturing process. 5. Add 3.5 80%. mL of 10% hydrolysate solution tonormal 46.5 mL of base media for 7 g/L hydrolysate concentration doubling time and viability above 6. Add 4.5 mL 10% hydrolysate solution to 45.5 mL of base media for 9 g/L hydrolysate concentration The next step is to further reduce the of percentage of current For more information, including hydrolysate usage culture medium by seeding 50% Select CD1000solutionprotocols, 7. Addin5.5 mLofofBD 10% hydrolysate to 44.5 mLvisit of base mediaat forbdbiosciences.com/advbio, 11 g/L hydrolysate concentration us today medium and 50% of the current culture medium at 3.0 – BD Technical at 800.638.8663 or 8. Add 6.5 mL of 10% hydrolysate solutioncall to 43.5 mL of baseService media & forSupport 13 g/L hydrolysate concentration 5.0 x 105 cells/mL. The cells should remain in this media contact your Bioprocess Application Specialist. combination for at least 2-3 passages, or until the cells retain Mixture Design normal doubling time and viability above 80%. (If the culture Hydrolysate blends can have synergistic effects in some base media, so there is a significant benefit to evaluating both shows longer doubling time, more time should be given to individual and blended hydrolysates. A mixture design is an easy way to begin this evaluation. To perform this type of adapt at this media combination). evaluation, it is necessary to determine the maximum concentration of hydrolysate to be added to the culture. Then, AdaptationProtocolならびにHydrolysate UsageProtocolをご用意しておりますので、ご希望の方は下記までお問い合わせください。