Français - R-Biopharm AG

ENZYTECTM fluid Acide acétique
Coffret pour:
4 x 80 déterminations
Version du:
06.06.2014
Réf. : 5226
Pour usage in vitro uniquement
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Réactifs pour la mesure de l’acide acétique par photométrie en UV dans des échantillons alimentaires, sur automates séquentiels
Méthode
Méthode à l‘ Acétate kinase (AK).
Principe
L‘acide acétique (Acétate) et l’Adénosine-5'-triphosphate (ATP) réagissent
en présence de l’enzyme Acétate kinase (AK) pour donner de l’Acétylphosphate et de l’Adénosine-5’-diphosphate (ADP). L’équilibre de cette
réaction est du côté de l’acide acétique :
Acétate + ATP <--- AK---> Acétyl-phosphate + ADP
Pour déplacer l’équilibre de la réaction vers l’Acétyl-phosphate, celle-ci est
transformée en Acetyl-CoA et en phosphate par l’action de la Coenzyme A
(CoA) et de l’enzyme Phospho-transacétylase (PTA) :
Acétyl-phosphate + CoA --- PTA---> Acétyl-CoA + Phosphate
L’ADP produite et le Glucose présent dans le tampon sont transformés en
D-Glucose-6-phosphate par l’action de l’hexokinase (ADP-dépendante) :
D-Glucose + ADP --- ADP-HK ---> D-Glucose-6-phosphate + AMP
Pour finir, le Glucose-6-phosphate est transformé par la déshydrogénase
correspondante (G6P-DH):
D-Glucose-6-phosphate + NAD+ --- G6P-DH --->
D-Glucono-δ-lactone-6-phosphate + NADH + H+
Dans cette réaction, le Nicotinamide-adénine-dinucléotide (NAD) est réduit
en NADH. La quantité de NADH est proportionnelle à la quantité d’acide
acétique dans l’échantillon.
Stockage et stabilité des réactifs
Les réactifs sont stables jusqu’à la fin du mois de la date de péremption
indiquée, à condition de les stocker entre 2 et 8 °C, et en évitant toute
contamination. Ne pas congeler les réactifs !
Avertissements et précautions
1.
2.
Le réactif contient de l’azide de sodium (0,95 g/l) comme conservateur.
Ne pas avaler ! Éviter tout contact avec la peau et des membranes
muqueuses.
Prendre les précautions nécessaires à l'utilisation de réactifs de
laboratoire.
Clarification de Carrez:
Peser ou pipeter avec précision une quantité suffisante d’échantillon dans
un flacon volumétrique de 100 ml, et rajouter env. 60 ml d’eau. Rajouter
successivement 5 ml de solution Carrez-I (Potassium-hexacyanoferrate(II)trihydrate) à 85 mmol = 3,60 g K4[Fe(CN)6] × 3 H2O/100 ml), puis 5 ml de
solution Carrez-II (sulfate de Zinc à 250 mmol = 7,20 g ZnSO4 × 7 H2O par
100 ml), et enfin 10 ml de NaOH 0,1 M. Bien mélanger après chaque rajout.
Remplir jusqu’à la marque, mélanger et filtrer.
Mode opératoire sur automates de biochimie
Il est impératif de réaliser ce test sur un automate de biochimie, car la
mesure est effectuée en temps fixé (cinétique en deux points). Il ne s’agit
pas d’une méthode en point final, et la loi de Lambert-Beer ne s’applique
pas. Des exemples d’applications sont donnés ci-dessous pour différents
automates et peuvent être facilement adaptés à n’importe quel autre
appareil de biochimie sauf le VP-i (le mono-réactif n’est pas possible). Si
l’échantillon a été pré-dilué, le facteur de dilution doit être pris en compte.
Paramètres de base pour automates de biochimie
Longueur d’onde :
primaire 340 nm / secondaire 415 nm
Chemin optique :
1 cm
Température :
37 °C
Mesure :
contre blanc réactif
Blanc
Échant. / calibrant
Échant. ou calibrant
4 µL
Eau distillée
4 µL
Réactif 1
240 µL
240 µL
Mélanger, incuber 300 sec. et rajouter :
Réactif 2
60 µL
60 µL
Mélanger, incuber pendant 200 sec. et lire l’absorbance (A1):
Incuber pendant 120 sec. et lire l’absorbance (A2).
Attention : il est impossible de travailler en mono-réactif (donc VP-i exclu)
ΔA = [(A2 – A1)échantillon ou calibrateur] - [(A2 – A1)blanc]
Préparation des réactifs
Calibration
Les réactifs ainsi que les standards sont prêts à l’emploi.
Matériel requis mais non fourni
Pour la calibration sur les automates de biochimie, nous recommandons le
standard Enzytec fluid multi-acides (réf. 5460, 3 x 3 mL). Ce standard est
prêt à l’emploi.
Eau distillée (aseptique et sans métaux lourds) et équipement général de
laboratoire.
Contrôle qualité
Contenu du coffret et concentration des réactifs
R1
R2
4 x 20,8 ml
Tampon
D-Glucose
AK
PTA
ADP-HK
G6PDH
4 x 5,5 ml
NAD
ATP
CoA
pH 8
10 mmol/L
≥ 2 kU/L
≥ 6 kU/L
≥ 300 U/L
≥ 4 kU/L
pH 6.5
≥ 15 mmol/L
≥ 5 mmol/L
≥ 0,3 mmol/L
Préparation des échantillons (le cas échéant)
Si les échantillons présentent l’une ou l’autre des caractéristiques détaillées
ci-dessous, lesquelles perturbent le test, suivre les instructions
correspondantes.
• Utiliser des échantillons liquides clairs, transparents et pratiquement
neutres. Si nécessaire diluer l’échantillon pour une concentration en
acétate allant jusqu’à 1200 mg/L.
• Filtrer ou centrifuger les solutions troubles.
• Eliminer le gaz carbonique si présent dans l’échantillon.
• Pour les échantillons contenant des protéines ou des matières grasses,
clarifier par la méthode de Carrez.
• Ecraser ou homogénéiser les échantillons solides et semi-solides. Peser
une quantité suffisante d’échantillon (en fonction du domaine de mesure)
dans un flacon volumétrique, extraire avec de l’eau et filtrer ; centrifuger
ou clarifier par la méthode de Carrez si nécessaire.
• Pour les échantillons contenant des graisses, peser une quantité
suffisante (en fonction du domaine de mesure) et extraire en chauffant
dans de l’eau, ou clarifier par la méthode de Carrez.
• Ajuster les échantillons acides ou basiques à un pH de 8 env., en
rajoutant KOH/NaOH ou HCl respectivement.
• Traiter les échantillons très colorés avec du Polyvinylpolypyrrolidone
(PVPP, par exemple 1 g / 100 ml d’échantillon).
Pour contrôler l’exactitude et la précision des résultats, utiliser des
échantillons de contrôle adéquats. La fréquence des contrôles et les limites
de tolérance doivent être définies au sein du laboratoire. De même, chaque
laboratoire doit définir les mesures à appliquer lorsque le contrôle est en
dehors des limites préalablement définies.
Performances
Domaine de mesure
Le test a été développé pour déterminer la concentration en Acétate jusqu’à
1200 mg/l (mesuré à 340 nm). Lorsque les valeurs dépassent le domaine de
mesure, les échantillons doivent être pré-dilués avec de l’eau distillée
(multiplier le résultat obtenu par le facteur de dilution).
Spécificité
Le test est spécifique de l’acide acétique. Il n’y a pas d’interférences par
l’acide citrique jusqu’à 2,5 g/l, l’acide ascorbique jusqu’à 1,0 g/l ou l’acide
tartrique jusqu’à 3,5 g/l.
Limite inférieure de détection
3 mg/L, mesurés à 340 nm
La limite inférieure de détection correspond à la plus petite concentration
statistiquement différente de la concentration zéro. Elle est calculée comme
3 x l’écart-type d’un échantillon zéro (sans acide acétique) mesuré 20 fois.
Résultats d’évaluations
Voir la fiche technique originale en anglais.
Gestion des déchets
Suivre les recommandations légales en vigueur.
Fabricant
Distributeur
Thermo Fisher Scientific Oy
Ratastie 2, P.O. Box 100
FI-01621 Vantaa, Finland
R-Biopharm AG
An der neuen Bergstrasse 17
D-69297 Darmstadt, Germany
ENZYTECTM fluid Acide acétique
Coffret pour
Réf. : 5226
4 x 80 déterminations
Pour usage in-vitro uniquement
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Exemples d’applications
Enzytec Junior / E / XL
Konélab / Arena
Généralités (définition du test):
Type de test
Photométrique
Nom entier
Acide acétique
Code informatique
ACET
Unité
mg/l
Nombre de décimales
0
Mode de validation
Automatique
Dilution 1 +
#
Type d’échantillon
Autres
Température
37 °C
Test utilise
Oui
De
A
Unité
Limites du test
#
#
mg/l
Absorbance initiale
#
#
A
Limites pour dilutions
#
#
mg/l
secondaires
Dilution secondaire 1 +
#
#
Facteur de correction
1.00
Décalage
0.00
Paramètres de calibration
Type de calibration
Linéaire
Fréquence de calibr. (j)
7
Points/calibrants
2
Validation
Manuelle
Sens de la courbe
Ascendante
Type de calibrants
Séparés
Identification calibrants
Eau / Acid combination standard
Concentration
0 / 200**
Correction à l’origine
Non
Erreur absolue (mA)
#
Erreur relative (%)
#
Min
Max
Limites réponse
#
#
Distribution (mode opératoire)
Blanc additionnel
Temps fixé
Excès antigène Non
Réactif 1
AceR1
volume réactif (µl) 160
distribuer avec Extra
Volume (µl) 20
lavage Non
Volume échantillon (µl)*
3*
distribuer avec Extra
Volume (µl) 10
diluant Eau
Incubation (sec)
300
Réactif 2
AceR2
volume réactif (µl) 40
lavage Non
distribuer avec Extra
Volume (µl) 10
Incubation (sec)
200
Mesure du blanc
Point-final
rép. min/max
#/#
Incubation (sec)*
180*
Mesure
Point final
λ 1 / λ 2 (nm) 340 / 405
type de mesure Temps fixé
#
**
*
Choix effectué par l‘opérateur
Valeurs cibles du calibrant utilisé
Programmation officielle définie par le fabricant.
rallonger le temps d’incubation à 600’’ voire 900’’
signaux plus élevés. Pour la même raison, nous
augmenter le volume échantillon à 8. Pour plus de
d’applications Konélab est disponible sur demande.
Nous préférons
pour avoir des
préférons aussi
détails, un livret
Nom
Nom abrégé
Mode
Longueur d’onde
Unités
Décimales
Conc. basse
Conc. haute
Nom du calibrant :
répétitions
intervalle
nombre
seuil
Contrôle prozone
Blanc échantillon
Flacon réactif R1:
vol. normal
vol. remesure
Échantillon:
vol. normal**
vol. remesure
pré-dilution
Flacon réactif R2:
vol. normal
vol. remesure
Flacon réactif R3:
vol. normal
vol. remesure
Temps d’incubation*
#
*
**
Paramétrage tests 1
Acétique
ACE
Réf. hommes basse
Deux points
Réf. hommes haute
340 / 405 nm
Réf. femmes basse
mg/l
Réf. femmes haute
0
Réf. pédiat.. basse.
0.0
Réf. pédiat. Haute
#
Réf. süreté inf.
Standard
Réf. sûreté sup.
multi-acide
1
Contrôle 1
1 jour
Contrôle 2
#
Contrôle 3
Non
Corrélation
(a)
Non
Y = ax + b
(b)
#
#
#
1.00
0
Paramétrage tests 2
Non
Facteur
(calculé)
220 µl
220 µl
15.0 µl
8.0 µl
Non
-
Blanc réactif
Oui
Absorbance basseAbsorbance haute
Rép. abs. Basse
Rép. abs. Haute
-0.1
3.000
-0.1
3.000
55 µl
55 µl
0
0
t1 = 31’’
t2 = 344‘’
Choix effectué par l‘opérateur
Temps maximum disponible en mode 2 points ; on peut aussi
programmer en mode point final bi-chromatique (340/405 nm) avec
8,5 min de temps d’incubation.
Le tableau général en page 1 prévoit 4 µl d’échantillon. Nos résultats,
obtenus sur notre appareil « ChemWell », indiquent qu’il est judicieux
d’augmenter le volume à 8 µl voire 15 µl. Dans ce cas, choisir un mode
de calibration non-linéaire.
Hitachi 717
TEST
CODE RÉACTION
VOLUME ÉCHANTILLON (µl)
VOLUMES RÉACTIF R1
VOLUMES RÉACTIF R2
LONGUEUR D’ONDE
TYPE CALIBRATION
STD.(1) CONC. POS.
STD.(2) CONC. POS.
STD.(3) CONC. POS
STD.(4) CONC. POS
STD.(5) CONC. POS
STD.(6) CONC. POS
LIMITE DEV STANDARD
LIMITE DUPLICAT
LIMITE D.O. SENSIBILITÉ
LIMITE D.O (CINET)
LIMITE PROZONE
VALEURS USUELLES
VALEURS D’ALERTE
FACTEUR INSTRUMENT
#
**
*
[ACE]
[2 point] : [40) – [50]*
[4] –[ 2]*
[240] – [50] – [NON]
[60] – [20] – [NON]
[405] [340]
[LIN] [1] [2]
[0] – [1]
[200**] - [2]
0–0
0–0
0–0
0–0
[0.1]
[100]
0
[0] – [CROIS]
[32000] – [1]
[3] – [1200]
[0] – [#]
[1.0]
Choix effectué par l‘opérateur
Valeurs cibles du calibrant utilisé
Programmation officielle définie par le fabricant. Nous préférons
rallonger le temps d’incubation à [30] – [50] pour avoir des signaux plus
élevés. Pour la même raison, nous préférons aussi augmenter volume
échantillon à 8 ou 15 µl selon la sensibilité et le domaine de mesure
désirés. Pour plus de détails, un livret d’applications Hitachi est
disponible sur demande.
ENZYTECTM fluid Acide acétique
Coffret pour
Réf. : 5226
4 x 80 déterminations
Pour usage in-vitro uniquement
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Hitachi 911/912
Hitachi 917
TEST [ ACE] [#]
NOM (abrégé) [ACE]
UNITE
[ mg/l ]
MODE
NOM (complet)
[ACTIVE]
[ACIDE ACETIQUE]
INTERVALLE QC
FACT. INSTR.
[0]
(Y=aX + b) a [1.0]
b [0.0]
VAL. USUELLES
TYPE 1
VAL. USUELLES
TYPE 2
AGE
M
F
- [ ]
- [ ]
[ ]
[ ]
[ ]
[ ]
[ ]
[ ]
- [ ]
- [ ]
[ ]
[ ]
[ ]
[ ]
[ ]
- [29]
- [29]
[22]
[22]
[ ]
VALEURS D’ALERTE
<TYPE1>
<TYPE 2>
- [ ]
- [ ]
[ ]
[ ]
VOL.
CDE. QUALITATIVE
STD
CONC.
POS
DILUANT.
STD.
LOT
[NON]
(1)
(1) [ ]
[0.0]
[#]
[4]
[0] [0] [#]
[ ]
(2)
(2) [ ]
[200**]
[#]
[4]
[0] [0] [#]
[ ]
(3)
(3) [ ]
[]
[ ]
[8]
[ ] [ ] [ ]
[ ]
(4)
(4) [ ]
[]
[ ]
[8]
[ ] [ ] [ ]
[ ]
(5)
(5) [ ]
[]
[ ]
[8]
[ ] [ ] [ ]
[ ]
(6)
(6) [ ]
[]
[ ]
[8]
[ ] [ ] [ ]
[ ]
TEST
CODE
REACTION
[ACE]
LONGUEUR
(SEC. / PRIM.)
D’ONDE
[415] [340]
[ ]
POINTS MESURE* [25*] - [31*] - [0] [0] DILUANT [301]
[99]
< TYPE 1 >
< TYPE 2 >
VOL. ÉCHANT. NORMAL***
[4]*** [0] [0]
[ ]
[ ]
[ ]
VOL. ÉCHANT. REDUIT
[2]
[0] [0]
[ ]
[ ]
[ ]
VOL. ÉCHANT. AUGMENTE
[8]
[0]
[0]
[ ]
[ ]
[ ]
LIMITE DE D.O
[0]
[320000]
[CROISS]
LIMITE PROZONE
[0]
[32000 ]
[SUP]
RÉACTIF
R1 [240]
[0]
[#]
[#]
R2 [0]
[0]
[#]
[#]
R3 [60]
[0]
[#]
[#]
R4 [0]
[0]
[#]
[#]
TYPE DE CALIB.
[LINEAIRE
]
[2]
[2]
[0]
[ ]
AUTO CALIB.
TIME OUT BLANC
LIMITE DEV. STD [999.9]
[0]
SPAN
LIM. DUPLICATION
[0]
[10000]
2 POINT
LIM. SENSIBILITE
[0]
[0]
COMPLET [0]
LIM. D.O STRD
[-32000] [32000]
CHANGMT. LOT [NON] LIM. COMPENS.
[ ]
FLACON
[NON]
[2Point final]
[10]
[ ]
Choix effectué par l‘opérateur
Programmation officielle définie par le fabricant ; nous préférons
rallonger le temps d’incubation à [20]-[31] = 3,7’ ou [20]-[49] = 9,5’ pour
obtenir des signaux plus élevés. Si l’on peut pipeter le flacon 2 en R2
au lieu de R3, on peut bénéficier d’un temps d’incubation plus long en
définissant des temps de mesure après R2 à [10]-[31] = 7’ ou
[10]-[49] = 13’
** Valeurs cibles du calibrant utilisé
*** Toujours pour obtenir des signaux plus élevés, nous préférons
augmenter le volume échantillon à 8 ou 15 µl selon la sensibilité et le
domaine de mesure désirés. Pour plus de détails, un livret
d’applications Hitachi est disponible sur demande.
Analyse
Type de test
Test / Temps / Points*
Longueurs d’onde
Vol échant. (norm)***
Vol échant. (réduit)
Vol échant. (augm.)
Diluant
Réactif (R1) T1
Réactif (R2) T2
Réactif (R3) T3
Réactif (R4) T4
Limite absorbance
Limite prozone
Cell Detergent
ACE
2 Point End
A
10
415 A 340 A
4***
0
0
2
0
0
8
0
0
00951 99
240
0
040
0
0
040
60
0
040
0
0
040
32000
croissante
0
32000 Supér.
Detergent 1
A
Ser/Pl
25*
31*
A
0 0
Timing
R1
R2
R3
0
0
0
0
A
A
Calibration
Calibration type
Linear
A
A
Point
2
Span Point 2
Weight
0
Autocalibration
Time Out
Change Over
Blank
Blank
A
Span
Blank
A
2Point
Full
SD Limit
200
Duplicate limit
100
%
32000
Abs
Sensitivity limit
-99999
999999
S1 Abs limit
-32000
32000
Domaine mesure
Code application
Nom du test
Data Mode
Control Interval
Facteur instrument (Y=aX+b)
Limite technique
Limite remesure
Valeurs normales
(Hommes)
Y
Y
A
A
(Femmes)
Y
Y
A
A
040
Unit
mg/dl
Acide acétique
On Board
A
1000
a= 1.0
b=
0.0
3
1500
20
1200
#
#
*
(Défaut)
Male
A
Range 3
#
A
Qualitative
Cancel
(1) 0
(2) 0
(3) 0
(4) 0
(5) 0
(6) 0
A
A
Autres
<Standard>
Code calib.
Concentration
Position
(1)
501
0
(2)
#
200**
Sample Volume
Diluent S. Vol
Diluent Volume
4
0
0
4
0
0
#
*
(3)
(4)
(5)
(6)
Choix effectué par l‘opérateur
Programmation officielle définie par le fabricant ; nous préférons
rallonger le temps d’incubation à [20]-[34] = 4’ pour avoir des signaux
plus élevés. Si l’on peut pipeter le flacon 2 en R2 au lieu de R3, on peut
bénéficier d’un temps d’incubation plus long en définissant des temps
de mesure après R2 à [10]-[34] = 7’.
** Valeurs cibles du calibrant utilisé
*** Toujours pour obtenir des signaux plus élevés, nous préférons
augmenter le volume échantillon à 8 ou 15 µl selon la sensibilité et le
domaine de mesure désirés. Pour plus de détails, un livret
d’applications Hitachi est disponible sur demande.

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