Alpha-2-Macroglobulin - Serum Application Note

Antithrombin III
Allgemeines Anwendungsmerkblatt
Anwendungsmerkblatt
Allgemeine Leitlinie für die Bestimmung von
Antithrombin III in Plasma
Allgemeine Informationen
Zweckbestimmung
Das Anwendungsmerkblatt bezieht sich auf die quantitative turbidimetrische Bestimmung von Antithrombin III in
humanem Probenmaterial, die auf Analysegeräten durchgeführt wird, für die keine spezifischen Leitlinien vorliegen (1).
Die auf einem vom Kunden genutzten Analysegerät erbrachte Leistung muss validiert werden.
Messbereich
Circa 0,10-0,50 g/L in Abhängigkeit von der spezifischen Kalibrator-Charge. Bei Post-Konzentration oder –Verdünnung
kann der Bereich ausgeweitet werden.
Referenzintervall
0,21-0,30 g/L (2). Es empfiehlt sich, das Referenzintervall für die lokale Population zu bestimmen.
Geräteeinstellungen
Leitlinien für das Programmieren des Analysegeräts finden sich auf Seite 3 im Abschnitt „Empfohlene
Geräteeinstellungen“.
Reagenzien
Antikörper
Reaktionspuffer
Verdünnungsmedium
Kalibrator
Kontrolle
Proben
Humanes heparinisiertes Plasma oder EDTA-Plasma. Im Humanserum liegen die Konzentrationen um circa 10 %
niedriger.
Stabilität: 7 Tage bei 2-8 ºC.
Kalibrator
Die Verdünnung der Standards wird entweder wie angegeben vom Gerät automatisch durchgeführt oder erfolgt
manuell.
Reaktionspuffer
Der Reaktionspuffer ist gebrauchsfertig. Stabilität nach Einfüllen in das Gerät: 28 Tage bei 2-12 ºC.
Antikörper
Die Verdünnung des Antikörpers erfolgt in Übereinstimmung mit der abschließenden Geräteeinstellung.
In seltenen Fällen kann der vorverdünnte Antikörper ein leicht getrübtes Aussehen aufweisen. In dieser Situation wird
das Filtrieren durch einen 0,22 µm Membranfilter empfohlen.
Stabilität des unverdünnten Antikörpers: Siehe Produktetikett.
Stabilität des vorverdünnten Antikörpers: 28 Tage bei 2-8 °C.
Stabilität nach Einfüllen in das Gerät: 28 Tage bei 2-12 °C.
Code-Nr.
Q 0103
S 2007
S 2005
OUID
OWSY
Bezeichnung
DakoCytomation Polyclonal Rabbit Anti-Human Antithrombin III
DakoCytomation Reaction Buffer 1
DakoCytomation Dilution Buffer 1
Dade Behring N Protein Standard PY
Dade Behring N/T Protein Control PY
Kapazität: 1 mL des vorverdünnten Antikörpers entspricht annähernd 10 Küvettenablesungen von Standards oder
Proben wenn pro Assay 100 µL verdünnte Antikörperlösung verwendet wird. Das Totvolumen des Reagenzfläschchens
muss bei der Berechnung der benötigten Reagenzienmenge berücksichtigt werden.
Stabilität der Kalibration
Es wird empfohlen, eine erneute Kalibration alle 28 Tage oder in den folgenden Situationen durchzuführen: Umstellen
der Reagenzcharge, Ansetzen einer neuen Antikörperverdünnung, Filtern des in Verdünnungsmedium angesetzten
Antikörpers oder wenn die Ergebnisse der Qualitätskontrolle außerhalb des Bereichs liegen, der durch das jeweilige
Labor bestimmt wurde. Die Stabilität der Kalibration ist allerdings auf dem genutzten Gerät zu validieren.
Störungsbeseitigung
Bei nicht annehmbarer Leistung sollte eine Neukalibration versucht werden. Reagenzien und Verfahren überprüfen.
Falls das Problem weiterhin bestehen bleibt, ist bitte mit dem Gerätelieferanten oder mit dem technischen
Kundendienst von DakoCytomation Kontakt aufzunehmen.
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Antithrombin III
Allgemeines Anwendungsmerkblatt
Beispiel der Leistungsdaten auf dem Hitachi 911
Sensitivität
Ein OD-Wert von circa 0,31 auf dem Hitachi 911 entspricht einer Antithrombin-III-Konzentration von circa 0,5 g/L.
Nachweisgrenze
Die Nachweisgrenze wird mit 0,025 g/L bestimmt.
Präzision
Bei einer Antithrombin-III-Konzentration von 0,23 g/l wurde die Intraassay-Präzision auf 1,3 % geschätzt.
Genauigkeit
Für Dade Behring N/T Protein Control PY, Code-Nr. OWSY, kann eine Antithrombin-III-Rückgewinnung von 90-110 %
erwartet werden.
Linearität
Der Assay ist innerhalb des Bereichs von 0,10-0,60 g/L linear.
Sicherheitsbereich
Für Antithrombin-III-Konzentrationen bis zu 1,9 g/L (der höchsten getesteten Konzentration) wurde kein
Antigenüberschuss nachgewiesen.
Interferenz
Bei Konzentrationen bis zu 5 g/L Hämoglobin und 600 mg/L Bilirubin wird keine Interferenz nachgewiesen. Triglycerid
verursacht Interferenz.
Alle in Literaturangabe 3 beschriebenen Pharmaka wurden entsprechend der in dieser Literaturangabe aufgestellten
Empfehlungen untersucht. Mit Ausnahme von Intralipid wurde keine Interferenz festgestellt.
Methodenvergleich
Nach dem vorliegenden Anwendungsmerkblatt durchgeführte Bestimmungen von Antithrombin III wurden mit anderen
im Handel erhältlichen turbidimetrischen Assays verglichen. Die Daten können auf Anforderung zur Verfügung gestellt
werden.
Literatur
1. Blirup-Jensen S. Protein Standardization III: Method optimization: Basic principles for quantitative determination of
human serum proteins on automated instruments based on turbidimetry or nephelometry. Clin Chem Lab Med
2001; 39:1098-1109.
2. Tietz NW. Clinical guide to laboratory tests. Philadelphia: W. B. Saunders Company; 1995 p. 64-7.
3. Sonntag O, Scholer A. Drug interference in clinical chemistry: recommendation of drugs and their
concentrations to be used in drug interference studies. Ann Clin Biochem 2001;38:376-85.
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Antithrombin III
Allgemeines Anwendungsmerkblatt
Empfohlene Geräteeinstellungen für die Bestimmung von Antithrombin-III im Humanserum
* Parameter
Empfehlung
Optische Wellenlänge (mm)
Inkubationszeit (s)
Probenverdünnung (Verd.faktor)
Volumen vorverdünnter Probe (µL)
Probenvolumen (µL) (=unverd.)
Verdünnungsmittel +Flush (für Probe+Reag.) (µL)
Reaktionspuffervolumen (µL)
PEG-Konz.. in Reak.puffer (%)
PEG-Konz. in Inkubationsvolumen
Inkubationsvolumen (µL)
Antikörperverdünnung (Antikörper-Verdünnungsfaktor)
Volumen verdünnter Antikörper (µL)
Antikörpervolumen (µL) (=unverd.)
Verdünnungsmittel +Flush (für Antikörper) (µL)
Gesamtvolumen (µL)
Reaktionszeit (s)
Analysezeit insgesamt (s)
10
120
5
100
20
50
600
5
4,0
750
4,5
100
44
150
1000
300
420
Verhältnis
Probenvol. (unverd.)
Antikörpervol. (unverd.)
0,45
[0,44 – 0,45]
Relation
PEG - Konz. Inkub. - Vol. (%) * Probenvol. (unverd.)
Inkub. - Vol.
Probenvol. (unverd.)
Gesamtvol.
0,11
[0,08 – 0,12]
Verhältnis
PEG-Konz. in Gesamtvolumen (%)
Standards
[0,020 – 0,024]
3,0
[2,8 – 3,4]
Verdünnungsfakt
Std 1 (höchste Konz.)
Std 2
Std 3
Std 4
Std 5
Std 6 (niedrigste Konz.)
*
0,020
2,50
3,33
5,00
6,67
10,00
20,00
fi Relativer
Konz.faktor
2,00
1,50
1,00
0,75
0,50
0,25
Weitere Erläuterungen zu den einzelnen Parametern sind bitte folgender Veröffentlichung zu entnehmen: “Introduction to DakoCytomation
General Application Notes”, Bestell-Nummer 30134.Intro, die auf Anforderung zugeschickt oder von www.DakoCytomation.com
heruntergeladen werden kann.
[ ] Verweist auf einen annehmbaren Bereich, der von verschiedenen Geräten bereitgestellt wird.
fi
Bezeichnet den relativen Konzentrationsfaktor, der für die Berechnung der relativen Konzentration (RC(i)) von Antithrombin III in den Standards
einer spezifischen Kalibrator-Charge (Calibrator) herangezogen wurde (C(Cal)); RC(i) = fi x C(Cal) .
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