Aus der urologischen Klinik und Poliklinik der Universitätsm edizin der Johannes G utenberg-Universität Mainz Die Bedeutung von CXCL8 für die Progression des Nierenzellkarzinoms Dissertation zur Erlangung des Doktorgrades der Medizin der Universitätsm edizin der Johannes G utenberg-Universität M ainz vorg ele g tvo n Elisabeth Daum aus D e z M ainz ， 2015 Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis................................................................................................................. 3 A bkurzungsverzeichnis............................................................................ แ .. แ ٠. แ .. ٠10 A b b ild u n g s v e rz e ih 1. Einleitung/Ziel der Dissertation 2. Literaturdiskussion.................................................................................. •…………·■■…·19 2.1 Struktur und Funktion des Chem okins C X C L 8 ............................................... 19 2.2 Struktur ，Funktion und Lokalisation der C hem okinrezeptoren CXCR1 und 2.3 Die CXCL8/CXCR1/2 Signalkaskade als M odulator von Inflammation und Angiogenese................................................................ . ٠ ٠. ٠ _ _. ٠ . _.. . ._ _٠ . ٠ 25 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 2.4 Die Rolle von CXCL8 2.4.1 " ٦ Tum orgenese und M etastasierung.....................27 CXCL8 und CXCR1/2 in Entstehung und Verlauf m aligner Prozesse ¡m A llgem einen............................................................................. ……·………………27 2.4.1.1 CXCL8 und CXCR2 in onkogener Transform ation …………………·27 2.4.1.2 GXCL8/CXGR1/CXCR2 und Tum orzellwachstum ••••………………·28 2.4.1.3 CXCL8 und Tum or.lnvasivitat.............................................................. 29 2.4.1 •4 CXCL8 und Inflammation in malignen Prozessen •…………………·29 2.4.1.5 CXCL8 und CXCR2 ¡n d e rT u m or-A n g io g e n ese ٠" " " " " " " . " " . " . " 3 1 2.4.1 •6 CXCL8 und CXCR1/CXCR2 in der M etastasierung 2.4.1.7 qi CXCR2/CXCR2-Liganden und Seneszenz: Chem okin-verm ittelte Inhibition von T u m o rg en e se .............................................................................. 33 2.4.1 ■8 Bedeutung ١~1٢4٧ 2.4.2 des D uffy-Antigen-Rezeptors für die Chem okin- ٠ ᄆ ᄅ 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 . 丨 丨 _ _ 丨 丨 . 丨 丨 丨 丨 丨 丨 _ 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 _ _ 丨 丨 丨 丨 . 丨 _ 丨 . 丨 丨 丨 _ 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 _ . 丨 丨 . „ . 丨 丨 丨 . . ^ E ntstehung ，Verlauf und Therapie des N ierenzellkarzinom s und Bedeutung von CXCL8 und C X C R 1 /2 ................................................................34 2.4.2.1 Inzidenz, Klassifikation und Ätiologie des N ierenzellkarzinom s...34 2.4.2.2 Die Bedeutung von Chem okinen mit ELR-Sequenz für die Progression des Nierenzellkarzinom s ……………………·…··■…■■……···……··37 2.4.2.3 Chem okine im Resistenzm echanism us des Nierenzellkarzinom s gegen etablierte T n e rapeutika....................................................................... …40 3. Material und Methoden 3.1 M a t e r i a l . . . . . 43 3.1.1 G e rä te ....................................... ………·……………·…•………·•43 3 .1 .2 V p rh ra iir.h Q m a tP ria liP n .............................................44 ا 3 1 .3 Flüssigkeiten 3.1.3.1 Angesetzte L ö sungen.......................................................................... 45 3.1.4 F e s ts to ffe .........................................................................................................45 3.1.5 Z ellkultur-Zubehör.............................................................. ……………·……··46 3.1.6 A n tik n rp p r Afi 3.1.7 P roteine.............................................................................. แ .... แ ..... แ 46 3.1.8 ....................47 3-1.9 Softw are............................................................................. Я11П7й1Щ п1йп.........................................................................................................47 3.2 M e t h o d e n . . . . . . . 48 4.1.2 Expressionsm uster des CXCL8-Rezeptors CXCR2 durch neutrophile G ranulozyten und NZK-Zellen der Linien 7 8 6 -0 , Α-498, Dibo, RC-1, Caki-1 und ◦ 잤비으 …··………■………………··…·……·…·…·…■…„^ 4.2 Einfluss von rekombinantem CXCL8 auf Zellproliferation, Zellvitalität und Zellzahl von 7 8 6 -0 und A -4 9 8 Z e lle n ………·…………·…·…·…··……………………·64 4.2.1 Proliferation von NZK-Zellen der Linie 7 8 6 -0 unter 24- und 48- stundiger Behandlung mit rekombinantem CXCL8 ………………………………·64 4.2.2 Proliferation von NZK-Zellen der Linie Α-498 unter 24- und 48. stündiger Behandlung mit rekombinantem C X C L 8 .....................................66 4.3 Eînfluss der CXCL8-Behandlung auf die NZK-Zellvitalität …··…·…··…·……67 4.3.1 Zellvitalität von 786-O-Zellen unter n x n i ftiR p h a n H ilin n ÇÜ 4.3.2 Zellvitalität von А-498-Zellen unter CXCL8-Behandlung •…………··…··69 4.4 Quantität der NZK.Zellen nach Behandlung mit rekombinantem C X C L 8 .70 4.4.1 Q uantitative Veränderungen von 786-O -Zellen nach CXCL8- B ehandlung................................................................................................./О 4.4.2 ᄅ 0&^ Q uantitative Veränderungen von А-498-Zellen nach CXCL8- ٥ 1٧ ᄆᄅ٠丨 丨 丨 丨 丨 ._丨 „丨 丨 丨 丨 _丨 丨 丨 丨 丨 丨 .丨 丨 .丨 丨 丨 _._.丨 丨 丨 丨 ٠丨 .丨 丨 丨 _.丨 丨 丨 ..... 丨 丨 丨 .丨 .. 丨 丨 丨 .丨 丨 丨 丨 丨 _丨 .丨 丨 丨 丨 .丨 丨 丨 丨 丨 .丨 ٠丨 丨 丨 . ٠. 丨 丨 丨 丨 _丨 72 ᄆ 5. D isku ssio n .._ ٠_ .. _. _ _ .. .. _ . _. ٠ ._ _ ..._ _ . . _76 丨 丨 丨 丨 丨 丨丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 S I Diskussion der E rg e bn isse …………■…·………………………·……■……·……·…■•75 5.1.1 Unterschiede in der Expression der C X C LS R ezeptoren CXCR1 und CXCR2 durch N ierenzellkarzinom zellen……■•…·……··………·………………·…·75 5.1.2 Die W irkung von CXCL8 auf Stoffwechselaktivität und Proliferation von N ierenzellkarzinom zellen....................................... ..■ __ ._ _ ٠٠. .._... ____ ٠__.٠.81 ᅵ 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨丨 丨 5.2 丨 丨 丨 Diskussion der M e th o de n …·…■……………………·■…·…………………■…·………88 5.3 Ausblick . ٠ ٠٠٠_ _٠..._丨 ٠٠_丨 .._丨 丨 ٠丨 .. ٠_丨 _٠丨 _丨 . ٠... ٠.._丨 .. 丨 丨 . ٠_丨 丨 ٠. ٠丨 .٠. ٠.丨 .... ٠٠٠丨 .丨 ._丨 丨 .__.丨 丨 .__丨 ٠__.丨 ._丨 ٠٠91 丨 丨 丨 6. Zusammenfassung 7. Literaturverzeichnis. ٠٠..........n.. ٠٠.... ٠.. ٠H.............٠... ٠٠٠... ٠٠٠.. ٠.... ٠٠... ٠٠.. ٠........ ٠٠٠.M...٠.95 δ■ ᅀᄆ &^ _ _ _. . _ . . .. . __ .. ٠_ _ .. ٠ .. .... ٠ .. ٠ . ٠ ٠„ ᄆᄅ 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨 丨丨 丨 丨 丨 丨 丨 8 1 اRohdaten D urchflusszytom etrie..........................................................…·……103 8.1.1 Neutrophile Granulozyten (Abb. 7, Abb· 9, Abb. 10)···.·····.········.······103 8 .1.1·1 Neutrophile Granulozyten, Isotypenkontrolle.............................103 8.1 •1.2 Neutrophile G ranulozyten ， 8.1.1.3 Neutrophile G ranulozyten C X C R 1 -2 ."_ “ " " " " ٠_ _ " " .“ ."_ """"_ 1 0 3 ， 8.1 •1.4 Neutrophile G ranulozyten C X C R 2-1.......................................„1 0 4 ， 8.1.1.5 Neutrophile G ranulozyten C X C R 2-2...... ٠. ٠. ٠....M.......٠................104 ， 8.1.2 7 8 6 -0 (Ahh ft Ahh 9 ,A b b .1 1 ) .......„ ............................. 8.1.2.1 7 8 6 -0 , Iso typ e n ko ntro lle ………·……………··……………………■……·104 8.1.2.2 7 8 6 -0 , C X C R 1 -1 …··…………·……………··……·……………·.…·…….·104 8.1.2.3 7 8 6-0 , 8.1.2.4 7 8 6 .0 , C X C R 2 -1 ………··…………·…………………………·.……………105 8·1·2·5 7 8 6 ·0 , 8.1.3 A-498 (Abb. 8 Abb■ Q| Ahh 11) ， 10R 8·1.3·1 Α-498, Isotypenkontrolle............................................................105 8 .1 3 .2 Α-498, Ο Χ ΰ Β 1 ٠1.Μ.٠.. ٠.....„... ٠...„ .. ٠.. ٠.......Μ ٠.. ٠„ . ٠٠...„....... ٠. ٠... ٠... ٠.106 8.1.3.3 Α-498, CXCR1.2.......M ...............................................................106 8.1.3.4 Α-498, C X C R 2-1……………·………·.…·…··…·…·.………………·…….·106 8 .1 .3 .5 Α .4 9 8 , CXCR2■2………………·…·…·····……·■……………….···…·…^ 8.1.4 Dibo (Abb. 8, Abb. 9, Abb. ” ） ·…··……·……………………··……··………··107 8.1.4.1 Dibo, Isotypenkontrolle..............................................................107 8.1.4.2 Dibo, C X C R 1-1…·……··…·………··………··………·………■…■•…···…··107 8-1.4.3 Dibo, C X C R 1 - 8.1.4.4 Dibo, n y p iR P ii 8.1.4.5 Dibo, n xP iR p ip 2 „ ^ . . . . . „ „ ...1 0 7 , , ,,., , , ,,■■■■-■-1๐ 7 , , ,„„...1 0 8 8.1.5 CCF-RC1 (Abb· 8, Abb. 9, Abb· ” )··…·…………·…·…·……" " ………….108 8.1.5.1 CCF.RC1, Isotypenkontrolle . . . . . . . . . . . . . 108 S 1 .5 .2 C C F -R C 1 CXCR1-1 .•……·……··……·……·…■■……·■…………………108 ， 8·1·5.3 CCF.RC1, CXCR1-2 •……·…·………·■………·…·…·…·………■•………108 S 1 .5 .4 C C F -R C 1 CXCR2-1 .•………·………··……·………………·…·…···……109 ， 8.1.5.5 CCF-RC1, C X C R 2 -2 …·…··…··………………·…··………………………109 8.1.6 Cakl-1 (Abb· 8, Abb. 9, Abb. 1 1 )…·……··……·………·………■…………·…109 8.1.6.1 Caki-1, 8.1.6.2 Caki-1, C X C R 1-1…·……………·■…………………………··……·………··109 8.1.6.3 8.1.6.4 C ak؛Ị C X C R 2 Ị …···……··…·■…………·……….…………………….….110 ， 8.1.6.5 Caki-1, C X C R 2 ^…·…………■···…………■■……·…■…·…·………… ح 8.1.7 Caki_2 (Abb. 8. Abb. 9 - Abb- ” ） ·……··………" ………………·……….…… 110 8.1.7.1 Gaki-2, Isotypenkontrolle........................................................... 110 8.1.7.2 Caki-2, CXCR1■1^·…■···……·····■···………………···……··…··… 8 .1 .7 3 Caki-2, C X C R 1-2....h... ٠............ ٠٠٠٠. ٠.... ٠.. ٠.H......h..٠.٠... ٠٠٠............. 111 8.1.7.4 Caki-2, C X C R 2 Ị.................................................................................111 8-1.7.5 Caki-2, C X C R 2-2……·…···……··…···········■……···…·…·… 111 8.2 Rohdaten P ro life ra tio n ste st……·…·……………·…··…………·…………·……■… 112 8.2.1. Rohdaten 786-0 24h C X C LS B ehandlung (A h h 1 9 ) 8.2.2 Rohdaten 786-0 48h CXCL8 ٠Behandlung (Abb· 1Я) 11P -- - - - || |,| |||1 1 Ρ 8.2.3 Rohdaten Α-498 24h C X C LS B ehandlung (Ahh 14)···"··.·····_···.··.···113 8.2.4 Rohdaten Α-498 48h C XCL8-Behandlung (Abb. 15)···················"_■■ 114 8.3 Rohdaten M TT-Test.............................................................................................114 8.3.1 Rohdaten 786-0 24h C XCL8-Behandlung (Ahh 16)·"__"·"·······"··.··114 8.3.2 Rohdaten 786-0 48h C XCL8-Behandlung (Abb. 17) 8 3 .3 U fi Rohdaten Α.498 24h C X C LS B ehandlung (Abb. 1 8 )…………………… 116 8.3.4 Rohdaten Α-498 48h C X C LS B ehandlung (Abb. 19)····..·········__"····· 117 8.4 Rohdaten K ristallviolett-A ssay............................................................... ……… 118 8.4.1 Rohdaten 786-0 24h CXCLe.Behandlung (Ahh 0 ( ] ) 11Q 8.4.2 Rohdaten 786-0 48h C X C LS B ehandlung (Abb. 21).·..·····.······."···.·119 8.4.3 Rohdaten Α-498 24h CXCL8 ٠Behandlung (Ahh 99) 1ΡΠ 8.4.4 Rohdaten Α-498 48h CXCLe.Behandlung (Ahh 23)··········..·...___····.121 D anksagung....................................................... 123 Tabellarischer Lebenslauf··........................................... 124
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